产品货号：
YT405
中文名称：
碱性磷酸酶(大肠杆菌)
英文名称：
BalbAP Alkaline Phosphatase
产品规格：
200U
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是一种热敏感的，可以催化DNA、RNA、核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸水解释放5′或3′末端磷酸基团的酶，也可以脱去蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上的磷酸基团。
BalbAP Alkaline Phosphatase是一种新型碱性磷酸酯酶，在百奥莱博的多种内切酶和PCR缓冲液中可保持100%活性，对于各种类型的DNA 5'末端的去磷酸化均可在37℃孵育10分钟即可完成，并且75℃孵育5分钟即可完全失活。
经限制性内切酶酶切的质粒5′端带有磷酸基团，在进行基因克隆时为避免质粒自连，可以使用BalbAP Alkaline Phosphatase去除5′末端磷酸基团。脱去5′末端磷酸基团的质粒不能发生自连。
碱性磷酸酶常被称作碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，是一类水解酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等，并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(CIAP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA或RNA 5'和3'末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5'末端去磷酸化以避免质粒自连等。
- 快速去磷酸化，只需37℃孵育10分钟即可；
- 快速失活，75℃孵育5分钟即可完全失活；
- 使用方便，在各种内切酶和PCR缓冲液中保持100%活性，可以和质粒DNA的消化同时进行；
- 操作步骤简单，对于5′或3′突出末端、平端等各种DNA的脱磷酸化采用完全相同的操作步骤；
- 可直接用于连接反应，经BalbAP Alkaline Phosphatase脱磷，并75℃孵育5分钟失活后可直接用于后续的连接反应。
- 通过去除载体或DNA片段5′末端的磷酸基团，防止载体或DNA片段自连；
- 质粒DNA的同时内切酶消化和脱磷；
- 通过5′末端脱磷，为5′末端磷酸化放射性标记准备模板；
- 去除DNA、RNA 5′或3′末端的磷酸基团；
- 用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。
大肠杆菌表达，表达基因为一种细菌碱性磷酸酯酶基因。
37℃条件下10分钟内，催化1μg线性化的pUC19 DNA5′末端脱磷所需的酶量定义为一个活力单位。
| 组分 | 规格 |
| BalbAP Alkaline Phosphatase(1U/μL) | 200U |
| 10×Reaction Buffer | 500μL |
保存：-20℃
20mM HEPES-NaOH(pH7.4)，1mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，0.1% Triton X-100，50%(v/v)glycerol。
不含DNA外切酶和内切酶，不含RNA酶。
10×Reaction Buffer：
100mM Tris-HCl(pH8.0 at 37℃)，50mM MgCl2，1M KCl，0.2% Triton X-100，10mM 2-mercaptoethanol，1mg/mL BSA。
75℃加热5分钟可以使BalbAP Alkaline Phosphatase失活。金属离子螯合剂对BalbAP Alkaline Phosphatase有抑制作用。
- 质粒DNA同时进行内切酶消化和5′末端脱磷：
- 参考如下表格设置去磷酸化反应：
成分 用量 质粒DNA 1μg 内切酶的Reaction Buffer(10×) 2μL 无核酸酶的去离子水 至18μL 内切酶 1μL BalbAP Alkaline Phosphatase(1U/μL) 1μL - 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育60分钟。
注意：如果质粒DNA消化和脱磷后用于后续的连接反应，推荐先参考上表进行内切酶消化，但不加入BalbAP Alkaline Phosphatase。内切酶消化6～16小时后，再加入BalbAP Alkaline Phosphatase 37℃孵育10分钟。内切酶消化时间比较长，可以大大减少自连克隆出现的几率。 - 75℃加热5分钟或根据内切酶失活的其他条件进行酶的失活。
- 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化已消化并且脱磷酸化的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购；如果切出的片段大于50bp，通常需要进行DNA凝胶电泳和切胶回收。DNA凝胶回收试剂盒(YT010)可以向百奥莱博订购。
- 参考如下表格设置去磷酸化反应：
- DNA、RNA的5′或3′末端脱磷
- 参考如下表格设置去磷酸化反应：
成分 用量 待脱磷的DNA或RNA 1～5μg 10×Reaction Buffer 2μL 无核酸酶的去离子水 至19μL BalbAP Alkaline Phosphatase(1U/μL) 1μL - 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育10分钟。
- 75℃加热5分钟失活BalbAP Alkaline Phosphatase。
- 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化已消化并且脱磷酸化的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购；如果切出的片段大于50bp，通常需要进行DNA凝胶电泳和切胶回收。
说明：上述脱磷反应可以用于5′或3′突出的DNA，也可以用于平末端DNA，反应条件相同，即均为37℃孵育10分钟。
- 参考如下表格设置去磷酸化反应：
- 蛋白去磷酸化
- 参考如下表格设置去磷酸化反应：
成分 用量 待去磷酸化的蛋白 1～10μg 10×Reaction Buffer 5μL 无核酸酶的去离子水 至45μL BalbAP Alkaline Phosphatase(1U/μL) 5μL - 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育60分钟。
- 加入EDTA至终浓度为50mM或加入钒酸钠至终浓度为10mM以终止去磷酸化反应。
注意：酶的最佳用量和37℃的最佳孵育时间需根据特定蛋白自行进行优化。
- 参考如下表格设置去磷酸化反应：
- 其他用途请参考上述用途或碱性磷酸酶的相关文献资料进行。
相关搜索：碱性磷酸酶(大肠杆菌)，BAP，AP，ALP，碱性磷酸酶，BalbAP Alkaline Phosphatase